pDＮA 纯化有什么大不同 BIA•整体柱•pDＮA纯化方案
发布时间：2019-12-2
BIA Separations，
更有一个洋气的名字：
BIA•整体柱•pDＮA纯化方案
BIA•整体柱•pDＮA纯化方案
| 常规方法 | BIA整体柱纯化 | 整体柱纯化方案的优势 | |
| 纯化步骤及流程对比 | |||
| 步骤 | 三步法 | 两步法 |
þ 步骤少 þ 裂解流程更加符合药品的生产标准 þ 纯化后的质粒纯度一样 þ 减少了分子筛的需求 þ 省时、省力、省钱 |
| 优化的前期处理 | 必须要用中空纤维柱浓缩样品 | 碱裂解法，CaCl2沉淀蛋白质和RNA | |
| 第一步 | 分子筛：去除RNA，同时将缓冲液置换为疏水柱缓冲液 | ||
| 第二步 | 疏水柱：分离开环DNA | DEAE离子柱：分离去除RNA，杂蛋白，内毒素等 | |
| 第三步 | 离子柱：分离杂蛋白，内毒素等 | C4柱：分离开环DNA | |
| 纯化成本对比 （以200mg小规模为例） | |||
| 所需耗材 | 10L分子筛 | 80ml套装柱 |
þ 总体成本可降低50% þ 规模越大，成本降低越多 þ GMP级别的接头，更符合GMP标准 þ 轻松放大，避免了装填验证带来的烦恼 |
| 100ml疏水柱 | |||
| 100ml离子柱 | |||
| GMP接头 | 1L以下的层析没有GMP级别的接头，不符合GMP的标准。 | 从8ml开配有GMP级别的接头 | |
| 纯化效果 （相同的纯化体积，相同的洗脱方法，相同上样体积） | |||
| 第一步效果 | 第一步DEAE离子柱纯化的效果，质粒的纯度已经达到90%以上 | 不言而喻 | |
| 疏水柱 | 常规疏水柱回收率和纯度不如BIA的C4整体疏水柱 | C4整体疏水柱的回收率和纯度要高于常规疏水柱 | |
BIA 整体柱两步法质粒纯化工艺流程总览
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